核心定位:負(fù)責(zé)單B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)分子克隆,基因重組,載體構(gòu)建及小量細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)工作。
主要職責(zé):
1、負(fù)責(zé)從單B細(xì)胞裂解液中提取RNA,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及抗體可變區(qū)基因(VH/VL)的擴(kuò)增與序列鑒定,設(shè)計(jì)并優(yōu)化抗體基因特異性引物,建立高效的單細(xì)胞RT-PCR體系。
2、負(fù)責(zé)將抗體基因克隆至哺乳動(dòng)物表達(dá)載體,構(gòu)建全長(zhǎng)IgG表達(dá)質(zhì)粒,優(yōu)化載體設(shè)計(jì),包括信號(hào)肽篩選、密碼子優(yōu)化及恒定區(qū)選擇,提升抗體表達(dá)水平。
3、負(fù)責(zé)重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,篩選陽(yáng)性克隆并進(jìn)行菌落PCR鑒定,執(zhí)行小量質(zhì)粒提取,進(jìn)行酶切鑒定、測(cè)序驗(yàn)證及質(zhì)粒質(zhì)量檢測(cè)(濃度、純度、超螺旋比例),建立并維護(hù)克隆菌株庫(kù),確保質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程中的可追溯性,優(yōu)化轉(zhuǎn)化效率與質(zhì)粒提取流程,提升構(gòu)建通量與成功率。
4、負(fù)責(zé)293F/CHO等懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代及凍存,維持細(xì)胞庫(kù)質(zhì)量。執(zhí)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,進(jìn)行抗體小量表達(dá),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件與培養(yǎng)參數(shù),提高抗體產(chǎn)量與質(zhì)量。
5、建立并維護(hù)各階段的標(biāo)準(zhǔn)化流程與質(zhì)控體系。
任職要求:
1、碩士及以上學(xué)歷,分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物工程、生物技術(shù)或相關(guān)專(zhuān)業(yè),2年以上分子克隆和細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)經(jīng)驗(yàn)。
2、熟練掌握RNA提取、RT-PCR、基因克隆、載體構(gòu)建及測(cè)序分析;具備引物設(shè)計(jì)與序列分析能力(熟悉SnapGene、Vector NTI等軟件)。
3、熟練掌握大腸桿菌轉(zhuǎn)化操作及陽(yáng)性克隆篩選;精通小量質(zhì)粒提取,具備質(zhì)粒質(zhì)量鑒定(酶切、測(cè)序、Nanodrop/Qubit檢測(cè))經(jīng)驗(yàn)。
4、熟練掌握293F/CHO等懸浮細(xì)胞培養(yǎng),熟悉瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及小量表達(dá)流程。
5、責(zé)任心強(qiáng),工作嚴(yán)謹(jǐn)、細(xì)致、有條理,能保證實(shí)驗(yàn)流程準(zhǔn)確可靠和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。
樂(lè)于協(xié)作,溝通能力良好,善于與上下游同事配合解決問(wèn)題。